哪些情况下需要做艾滋病耐药检测？

　　HIV耐药是导致艾滋病抗病毒治疗失败的重要原因之一。在2020版《全国艾滋病检测技术规范》继续包含艾滋病耐药检测的内容，关于艾滋病耐药检测我们要了解的哪些内容呢?

　　什么是艾滋病耐药？

　　也称艾滋病病毒（HIV）耐药，是指由HIV遗传变异引起的、对抗病毒药物抑制作用敏感性降低或不敏感的现象。

　　艾滋病耐药从何而来？

　　（1）直接感染 当感染的毒株为HIV耐药毒株时，即发生了原发性耐药，也称传播性耐药。

　　（2）药物选择 HIV是一种复制速度快且极易变异的病毒，在没有抗病毒药物时，HIV耐药突变株会随机出现，但没有复制优势，不会在体内积累；在抗病毒治疗时，当药物浓度不足时，HIV复制不能被完全抑制，HIV耐药突变株的复制优势会显现出来，继而耐药突变株逐渐积累增多，从而产生继发性耐药，也称获得性耐药。

　　艾滋病耐药如何检测？

　　（1）基因型检测 通过测序或基因芯片杂交等方法，检测HIV基因组中是否有耐药相关突变。基因型检测通常使用测序法，检测流程如下：以HIV的基因组RNA为模板，逆转录PCR扩增目的基因片段，测序获得HIV基因序列，与野生型序列进行比对，判断是否有耐药相关基因突变，再通过耐药数据库的算法关联耐药程度。样本类型可为血浆和干血斑。测序方法通常采用Sanger测序法，随着测序技术的发展，也逐渐开始使用深度测序法。

　　（2）表型检测 又称体外药敏实验，以50%抑制浓度（IC50）来表示，将待测毒株与野生型毒株的IC50比较，通过倍数改变（Fold change，FC）来评估耐药程度。待测病毒可为直接从感染者体内PBMC中分离培养的病毒，也可为含感染者HIV基因的重组病毒。

　　一般来说，基因型检测的操作更简单，而且检测周期短，所以在临床上使用得更多，但是表型检测针对复杂突变和新型药物的耐药检测更有优势。

　　基因型耐药检测结果如何看？

　　（1）耐药突变的表示方法：耐药突变是HIV基因核苷酸序列的变化，但采用氨基酸的变化来表示，格式如下：野毒株的氨基酸＋氨基酸的位置＋突变后的氨基酸，如K103N，是HIV逆转录酶的第103位氨基酸从赖氨酸（K）突变为天冬酰胺（N）。

　　（2）耐药解释系统：指具有耐药程度算法的数据库，通过算法可将耐药突变结果转换为耐药程度。例如，在应用较广泛的Stanford HIVdb耐药解释系统中，K103N突变的耐药程度为对奈韦拉平（NVP）和依非韦伦（EFV）高度耐药。

　　HIV耐药检测的注意事项

　　（1）检测时机：由于HIV极易突变，当耐药患者停药或中断治疗时，体内没有抗病毒药物时，野生株的复制优势显现并逐渐积累，最后将检测不出耐药，因此耐药检测的最佳时机为患者正在抗病毒治疗时，或中断治疗一个月内。

　　（2）警惕样本间交叉污染，检测过程中需要设置空白和阴性对照，并通过序列进化树分析，排除交叉污染。

　　（3）未检出耐药突变时，不排除比例较低的耐药毒株存在。这是因为当耐药毒株在个体内病毒准种中的比例低于10～20%时，利用Sanger测序法通常检测不到其存在。

（艾防中心病毒及免疫研究室供稿）